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检验专业考试临床检验基础知识篇一
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小吞噬细胞的运动可以分成随机运动和定向运动，前者类似于布朗运动。检测方法是将采集的白细胞悬液滴于玻片上，用光学显微镜直接观察其运动。也可用毛细血管法将细胞悬液装入硅化毛细血管中，稍加离心，使细胞沉积在一端，切去无细胞的毛细血管段，继而移放在含细胞培养液的培养小瓶中，37℃温育18～20h，游动的细胞将从毛细血管内外移，在管口形成一细胞团，根据细胞面积可判断受检中性粒细胞活动的强弱。某些患者中性粒细胞的任意运动明显减弱，甚至消失。中性粒细胞的定向运动表现为趋化运动，测定方法有多种，其原理相同，而方法大同小异，常用以下两法：
小室法又称滤膜小室法，采用特殊的小盒装置，盒中以一片3～5μm孔径的微孔滤膜将盒分为上下两小室。上室加受检的白细胞悬液;下室加细菌菌体或其产物、酵母菌活化的血清等趋化因子。置37℃温育数小时。上室中的中性粒细胞因受下室内趋化因子的招引，使细胞由滤膜微孔进入滤膜内，最后取滤膜，经固定、干燥、着染、脱色等步骤，将透明后的滤膜置油镜下检测细胞在膜内通过的距离，求其趋化单位。
2.琼脂糖凝胶平板法将含小牛血清的1%琼脂糖倾到在玻片或平皿中制成凝胶平板，继而打孔，每三孔为一组，中央孔加细胞悬液，两侧孔分别加趋化因子或对照培养液，经37℃温育2～3h后，用2%戊二醛固定，移去琼脂糖层，经染色后，测量细胞运动的距离，按下式计算移动指数。
检测原则是将受检细胞悬液按一定比例混和，继加活的白色念珠菌悬液，保温生，加美蓝溶液作活体染色，取样涂片镜检。如胞内白色念珠菌呈蓝色，表示该菌已被杀死，共计100200个细胞，分别求其吞噬率和杀菌率。
溶细胞法更能直接反映细胞杀菌的情况，将受检的.细胞悬液与一定量已经新鲜人血清调理过的大肠杆菌或金黄色葡萄球菌悬液混合后，置37℃，每隔一定时间取定量培养物，稀释后接种固体平板培养基，37℃培养18h后，计算菌落数，据以计算中性粒细胞的杀菌能力。
正常情况下，对大肠杆菌的杀菌率约为90%，对金黄色葡萄球菌的杀菌率约为85%.
在临床常用的硝基四氮唑蓝(nbt)还原试验，本法用以检测中性粒细胞的胞内杀菌能力，由于中性粒细胞在杀菌过程中能量消耗剧增，耗氧量亦随之相应增加，磷酸己糖旁路代谢活力增强，葡萄糖6-磷酸氧化脱氢，此时加入nbt可接受所脱的氢，使原先呈淡黄包的nbt还原成点状或块状甲朊颗粒并沉积在胞浆内。
近此年来还采用了新颖的化学发光法，中性粒细胞在吞噬经调理的金黄色葡萄球菌过程中，伴有化学发光的产生，故可用化学发光仪测定中性粒细胞的吞噬功能及其代谢活性。实验证明全血化学发光试验可同时获得两种信息，即中性粒细胞的吞噬功能、代谢活性及受检血清的调理功能。由于中性粒细胞的氧代谢活性与对细胞的吞噬率密切相关，杀菌能力与发光强度相平行，因此化学发光法可检测细胞杀菌功能。因此吞噬细胞化学发光测定法可用以研究中性粒细胞的吞噬功能，代谢活性和血清调理功能，它可在生理温度和中性环境下测定，能较好地反映生理条件下吞噬细胞的功能，具有准确灵敏、样品用量少，简便快速等优点。其敏感性高于nbt还原试验。
正常小鼠肝中枯否细胞可吞噬清除90%炭粒，脾巨噬细胞约吞噬清除10%炭粒，据此给小鼠定量静脉注射印度墨汁(炭粒悬液)，间隔一定时间反复取静脉血，测定血中炭粒的浓度，根据血流中炭粒被廓清的速度，判断巨噬细胞的功能。
(二)吞噬功能的检测
巨噬细胞具有较强的吞噬功能，实验室常用比细菌大的细胞性抗原作为被吞噬颗粒，如鸡红细胞。其检测原理是将受检细胞与适量的颗粒抗原混合后，置37℃保温0.5～1h，其间时加振摇，最后离心取测定细胞制成涂片，染色镜检，分别计数出吞噬百分比和吞噬指数。各实验室应根据自己的条件建立正常参考值。
(三)巨噬细胞溶酶体酶的测定
巨噬细胞富含溶酶体酶，如酸性磷酸酶、非特异性酯酶、溶菌酶等，测定这些酶的活性也是衡量巨噬细胞功能的实用指标之一。
1.酸磷酸酶的测定
(1)硝酸铅法：本法优点是用普通试剂，价格便宜，一般实验室均有条件做，封片后可较长时间保存，并可用电子显微镜研究观察细胞的超微结构。缺点是细胞必需固定，而且固定条件要求严格，如处理不当酶活性易消失，反应步骤也较多。
该法基本原理是在适当的酶性条件下，巨噬细胞内的酸性磷酸酶能使β甘油磷酸钠水解成磷酸盐后，后者与硝酸铅反应产生磷酸铅，而磷酸铅再与硫酸铵反应则形成黑色硫化铅，沉积在胞浆内酸所在处，显示棕黑色颗粒。酶活性强弱可根据颗粒的数量和粗细不同而分级判断，颗粒数量少则细的为+，颗粒多而粗的为++，颗粒很多且很粗的为+++。
(2)偶氮法：本法操作简便，反应液中的底物α-萘磷酸钠被酸性磷酸酶分解后，形成萘酚和磷酸盐，而萘酚结构中的羟基(-oh)邻近的活泼碳原子，立即与偶氮染料起反应，而产生鲜艳的棕色沉积在酶所在处，缺点是封片后保存时间短。
2.非特异性酶的测定该酶比较稳定，酶活性丧失较慢，细胞经涂片干燥，置室温至少可保存半天至一天，因此特别有利于临床检验室采用。
常用α-萘醋酸法，该酶可将-萘醋酸分解成萘酚和醋酸，萘酚迅速与偶染料结合，形成有色反应物而沉积。
(四)巨噬细胞促凝血活性测定
激活巨噬细胞可产生一种与膜结合的凝血活性因子，加速正常血浆的凝固，为此取已经37℃预温的正常兔血浆和cac12混合液，加入经粘附单层巨噬细胞的试管中，移置37℃，即时记录血浆凝固时间。实验证明当巨噬细胞与lps、肿瘤相关抗原或hbsag等温育后，可见血浆凝固时间明显缩短。本法稳定方便，也是检测不同疾病患者巨噬细胞功能的指标之一。
(五)巨噬细胞表面受体的检测
成熟的巨噬细胞表面具有fc受体和c3b受体，这些受体能识别经igg和c3b调理的颗粒，并迅速与之结合，促使细胞对相应颗粒的吞噬，为此检测这些受体可间接判断巨噬细胞的功能。常用抗羊红细胞致敏的羊红细胞悬液作指示物进行ea花环试验，也可用抗原(e)抗体(a)补体(c)复合物作eac花环试验。由于操作繁锁，现仅供研究用。
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